鄰苯二甲醛和 強(qiáng)化戊二醛 殺滅細(xì)菌芽孢效果比較
發(fā)布時(shí)間：
2022-09-27
鄰 苯 二 甲醛 (OPA)通 過(guò) 美 國(guó)食 品與 藥品 安 全 管理 局 (FDA)認(rèn)證高水平消毒劑后，在國(guó)外 已用于 內(nèi)鏡 的消毒 【1]，國(guó) 內(nèi)近 年來(lái)對(duì)其十分關(guān)注【～ 。為 了解鄰苯 二 甲醛 消毒劑 殺滅 芽 孢的能力，我 們選擇 了進(jìn) 口鄰 苯二 甲醛 消毒劑和 國(guó)產(chǎn)強(qiáng) 化 戊二醛消毒劑進(jìn)行 比較，采用載體定量殺菌試驗(yàn)，對(duì)其實(shí)驗(yàn)室 殺滅枯草桿菌黑色變 種芽孢效 果和使 用穩(wěn) 定性進(jìn)行 了觀 察。 現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下 。
1 材 料與方法
1．1 材料
進(jìn) 口鄰苯二甲醛消毒劑(美 國(guó)強(qiáng) 生公 司)，鄰苯二 甲醛標(biāo)示含量為 0．50％～0．60％；強(qiáng)化戊 二醛 消毒劑為 醫(yī)院 內(nèi)鏡 消毒使 用產(chǎn)品，戊二醛標(biāo)示含量 2．0％-2．2％，
1．2 理化指標(biāo)檢測(cè) 消毒劑有效成份含量測(cè) 定參照《消毒 技 術(shù)規(guī)范>[4]鄰苯二 甲醛消毒劑采用高效液相色譜 法測(cè) 定產(chǎn)品 中正一鄰苯 二 甲醛的含量 ；強(qiáng)化戊二醛 消毒劑 采用硫 酸滴定 液 測(cè) 定產(chǎn)品中戊二醛含量 ；消毒劑 pH值 測(cè)定 采用 PHS-25精 密 數(shù)顯酸 度計(jì)。
1．3 載體制備
取枯 草桿 菌黑 色變種 (ATCC 9372)芽孢 懸 液，用胰酪胨 大豆 (TSB)營(yíng) 養(yǎng) 肉湯配 制染菌 用菌 懸液。取 試 驗(yàn) 菌懸 液 0．02rnl滴染于無(wú)菌不銹鋼 圓片上 (直徑 15mm，厚
0．5ram)，置 37℃溫箱烘干，制成 菌片備用。
1．4 中和劑鑒定試驗(yàn)
按 《消毒技術(shù)規(guī)范>規(guī) 定設(shè) 計(jì) 6組，以 枯草桿 菌黑 色變種芽孢為 試驗(yàn)菌 ，采用 載體 定量殺菌 試驗(yàn) 程 度進(jìn)行 [5]。
1．5 載體浸 泡定 量殺 菌試 驗(yàn) 將 含每 個(gè) 菌 片 5ml消毒 液 (陽(yáng)性對(duì)照為磷酸鹽緩 沖液 )的無(wú)菌平皿置于 (20±1)℃恒 溫 水浴中，加入 菌片作用 i定時(shí)間，取 出菌片，放 入含 5ml中 和劑 的試管 內(nèi)，用 電動(dòng) 混合器 震蕩 40S，洗脫 鋼 片上的 菌，中 和作 用 10rain；取洗 脫液作 活菌計(jì) 數(shù)，計(jì)算殺滅對(duì)數(shù)值 。所 有 試驗(yàn)重復(fù) 3次。
1．6 連續(xù)使 用穩(wěn)定性試驗(yàn)
分 別取雙 份 2000ml的鄰苯 二 甲醛、強(qiáng) 化戊二醛 消毒劑原液分 別盛裝 于 2個(gè)無(wú) 菌帶蓋搪 瓷 盤(pán) 中，各放入清潔的 醫(yī)用鑷子 、剪 刀、止 血鉗等 醫(yī)療器械 達(dá) 到 滿載要求 ，每 Ft將器械取出 ，用 清水洗滌，瀝干 ，再浸泡到消毒 液 中。按每個(gè)載 體 10ml取 浸泡 當(dāng) 日、7，14d搪 瓷盤(pán) 中的 消 毒液至無(wú) 菌平皿，置于 (20±1)℃ 恒溫 水浴 5rain，將試 驗(yàn) 菌 片浸沒(méi)其 中進(jìn)行 載體定量 殺菌試驗(yàn)。
2 結(jié) 果
2．1 理化 指標(biāo)測(cè)定
鄰苯二 甲醛消毒劑為單方制劑 ，經(jīng)測(cè) 定 含正一鄰苯二 甲醛 0．53％，pH 值 為 7．45；強(qiáng) 化戊 二醛 消毒 劑 是戊二醛和 陽(yáng)離子表 面活性劑 的復(fù)方 制劑 ，經(jīng)測(cè) 定含戊 二醛
2．18％，活化前 pH值 2．55，活化后 pH值 7．74。
2．2 中和 劑鑒定 試驗(yàn) 用含 3g／L卵 磷脂 、3．0％吐溫一8O、 1O L甘氨酸 的磷酸 鹽緩 沖液 (PBS)作為 中和 劑，可有效 中 和鄰 苯二 甲醛消毒劑原液和強(qiáng)化戊二醛 消毒劑 液對(duì)試驗(yàn)菌 殘留作用，且中和劑溶液及其中和產(chǎn)物對(duì)枯草桿菌黑色變種 芽孢 的生長(zhǎng)無(wú)明顯影響。
2．3 對(duì)細(xì)菌芽胞的殺滅效果 鄰苯二甲醛消毒劑原液作用 3h，對(duì)不銹鋼 片上 枯 草桿 菌黑色 變 種 芽孢 的 殺滅 對(duì)數(shù) 值 為 3．21，作用 10h殺滅 對(duì)數(shù)值 >6．10；強(qiáng) 化戊二 醛消毒劑 原 液 作用 0．5h，對(duì) 枯 草 桿 菌黑 色 變 種 芽 孢 的 殺滅 對(duì) 數(shù)值 達(dá) 到 3．43，作用 3h的殺滅對(duì) 數(shù)值 >6．10(表 1)。
2．4 連 續(xù)使 用穩(wěn) 定性試驗(yàn)
鄰苯二 甲醛消毒劑原 液連續(xù) 浸 泡 醫(yī)療器械 7、14d后，作用 3h，對(duì)不銹鋼片上枯草 桿菌黑 色 變 種芽孢的平均 殺滅對(duì)數(shù)值 均 >3．00；強(qiáng) 化戊二 醛消毒 劑原 液連續(xù)浸泡 醫(yī)療器械 7、14d后，作 用 3h，對(duì)芽孢 的殺滅對(duì)數(shù) 值均 >6．o0(表 2)。 表 1 不 同時(shí)間 2種消毒劑對(duì)枯草桿菌 黑色 變種 芽孢殺滅 效果比較
注 ：陽(yáng)性對(duì) 照組平均菌 數(shù)為 1272000cfu／片。結(jié) 果為 3次試驗(yàn) 平均值 。
表 2 2種 消毒 劑不 同作 用時(shí) 間的平均殺滅對(duì)數(shù)值
注 ：結(jié)果為 3次試驗(yàn)平均值。
3 討 論
本次試 驗(yàn)結(jié) 果表 明，0，53％鄰苯 二 甲醛 消毒劑 原液 作用 3h可對(duì)芽孢達(dá)到 消毒效 果，但 與強(qiáng) 化戊 二醛 的 殺芽 孢效果 有一定差距，與黃育 紅報(bào)道 基本一 致 【6】。本 次鄰 苯二 甲醛消 毒劑 殺滅芽孢 的結(jié)果 明顯 不如 許能 鋒等 報(bào)道 【3】的 國(guó)內(nèi)鄰 苯 二甲醛 消毒 劑，可能與進(jìn) 口為單方制劑 ，而 國(guó)內(nèi)鄰苯二 甲醛 消
毒劑多與醇類、季銨鹽類及乳 化劑等復(fù) 配，且 pH值在 8．0以 上有關(guān) ；許能鋒等 已證實(shí) ，含表面活性劑的堿性鄰苯二 甲醛 殺 芽孢效果最 好 。 由于戊二醛在 內(nèi)鏡 消毒 中逐漸 暴露諸 多 問(wèn)題 ，且 使用 前 要活化、使用濃度相對(duì)高等缺 陷，國(guó) 內(nèi)外學(xué)者均提 出用鄰苯 二 甲醛消毒劑 替代戊 二醛 用于 內(nèi)鏡 消毒 [2， 。本 次研 究證 明， 鄰苯二 甲醛 消毒 劑具備高 水平消毒效果 ，且使 用穩(wěn)定性好，可 連續(xù)使用 14d。 實(shí)驗(yàn) 中發(fā)現(xiàn)鄰 苯二 甲醛 消毒 液接 觸皮 膚、衣 物后 會(huì)有灰 色反應(yīng)不易洗去；其產(chǎn)品說(shuō)明中也標(biāo)注“消毒后務(wù)必正確沖洗 干凈 ；可能引起過(guò)敏反應(yīng) ；與 消毒液接 觸可能使裸露 的皮膚或 衣服染 色；應(yīng)避免與眼睛、皮膚 或衣服接 觸”，使用中仍應(yīng) 引起 注意 。
鄰 苯 二 甲醛 (OPA)通 過(guò) 美 國(guó)食 品與 藥品 安 全 管理 局 (FDA)認(rèn)證高水平消毒劑后，在國(guó)外 已用于 內(nèi)鏡 的消毒 【1]，國(guó) 內(nèi)近 年來(lái)對(duì)其十分關(guān)注【～ 。為 了解鄰苯 二 甲醛 消毒劑 殺滅 芽 孢的能力，我 們選擇 了進(jìn) 口鄰 苯二 甲醛 消毒劑和 國(guó)產(chǎn)強(qiáng) 化 戊二醛消毒劑進(jìn)行 比較，采用載體定量殺菌試驗(yàn)，對(duì)其實(shí)驗(yàn)室 殺滅枯草桿菌黑色變 種芽孢效 果和使 用穩(wěn) 定性進(jìn)行 了觀 察。 現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下 。
1 材 料與方法
1．1 材料
進(jìn) 口鄰苯二甲醛消毒劑(美 國(guó)強(qiáng) 生公 司)，鄰苯二 甲醛標(biāo)示含量為 0．50％～0．60％；強(qiáng)化戊 二醛 消毒劑為 醫(yī)院 內(nèi)鏡 消毒使 用產(chǎn)品，戊二醛標(biāo)示含量 2．0％-2．2％，
1．2 理化指標(biāo)檢測(cè) 消毒劑有效成份含量測(cè) 定參照《消毒 技 術(shù)規(guī)范>[4]鄰苯二 甲醛消毒劑采用高效液相色譜 法測(cè) 定產(chǎn)品 中正一鄰苯 二 甲醛的含量 ；強(qiáng)化戊二醛 消毒劑 采用硫 酸滴定 液 測(cè) 定產(chǎn)品中戊二醛含量 ；消毒劑 pH值 測(cè)定 采用 PHS-25精 密 數(shù)顯酸 度計(jì)。
1．3 載體制備
取枯 草桿 菌黑 色變種 (ATCC 9372)芽孢 懸 液，用胰酪胨 大豆 (TSB)營(yíng) 養(yǎng) 肉湯配 制染菌 用菌 懸液。取 試 驗(yàn) 菌懸 液 0．02rnl滴染于無(wú)菌不銹鋼 圓片上 (直徑 15mm，厚
0．5ram)，置 37℃溫箱烘干，制成 菌片備用。
1．4 中和劑鑒定試驗(yàn)
按 《消毒技術(shù)規(guī)范>規(guī) 定設(shè) 計(jì) 6組，以 枯草桿 菌黑 色變種芽孢為 試驗(yàn)菌 ，采用 載體 定量殺菌 試驗(yàn) 程 度進(jìn)行 [5]。
1．5 載體浸 泡定 量殺 菌試 驗(yàn) 將 含每 個(gè) 菌 片 5ml消毒 液 (陽(yáng)性對(duì)照為磷酸鹽緩 沖液 )的無(wú)菌平皿置于 (20±1)℃恒 溫 水浴中，加入 菌片作用 i定時(shí)間，取 出菌片，放 入含 5ml中 和劑 的試管 內(nèi)，用 電動(dòng) 混合器 震蕩 40S，洗脫 鋼 片上的 菌，中 和作 用 10rain；取洗 脫液作 活菌計(jì) 數(shù)，計(jì)算殺滅對(duì)數(shù)值 。所 有 試驗(yàn)重復(fù) 3次。
1．6 連續(xù)使 用穩(wěn)定性試驗(yàn)
分 別取雙 份 2000ml的鄰苯 二 甲醛、強(qiáng) 化戊二醛 消毒劑原液分 別盛裝 于 2個(gè)無(wú) 菌帶蓋搪 瓷 盤(pán) 中，各放入清潔的 醫(yī)用鑷子 、剪 刀、止 血鉗等 醫(yī)療器械 達(dá) 到 滿載要求 ，每 Ft將器械取出 ，用 清水洗滌，瀝干 ，再浸泡到消毒 液 中。按每個(gè)載 體 10ml取 浸泡 當(dāng) 日、7，14d搪 瓷盤(pán) 中的 消 毒液至無(wú) 菌平皿，置于 (20±1)℃ 恒溫 水浴 5rain，將試 驗(yàn) 菌 片浸沒(méi)其 中進(jìn)行 載體定量 殺菌試驗(yàn)。
2 結(jié) 果
2．1 理化 指標(biāo)測(cè)定
鄰苯二 甲醛消毒劑為單方制劑 ，經(jīng)測(cè) 定 含正一鄰苯二 甲醛 0．53％，pH 值 為 7．45；強(qiáng) 化戊 二醛 消毒 劑 是戊二醛和 陽(yáng)離子表 面活性劑 的復(fù)方 制劑 ，經(jīng)測(cè) 定含戊 二醛
2．18％，活化前 pH值 2．55，活化后 pH值 7．74。
2．2 中和 劑鑒定 試驗(yàn) 用含 3g／L卵 磷脂 、3．0％吐溫一8O、 1O L甘氨酸 的磷酸 鹽緩 沖液 (PBS)作為 中和 劑，可有效 中 和鄰 苯二 甲醛消毒劑原液和強(qiáng)化戊二醛 消毒劑 液對(duì)試驗(yàn)菌 殘留作用，且中和劑溶液及其中和產(chǎn)物對(duì)枯草桿菌黑色變種 芽孢 的生長(zhǎng)無(wú)明顯影響。
2．3 對(duì)細(xì)菌芽胞的殺滅效果 鄰苯二甲醛消毒劑原液作用 3h，對(duì)不銹鋼 片上 枯 草桿 菌黑色 變 種 芽孢 的 殺滅 對(duì)數(shù) 值 為 3．21，作用 10h殺滅 對(duì)數(shù)值 >6．10；強(qiáng) 化戊二 醛消毒劑 原 液 作用 0．5h，對(duì) 枯 草 桿 菌黑 色 變 種 芽 孢 的 殺滅 對(duì) 數(shù)值 達(dá) 到 3．43，作用 3h的殺滅對(duì) 數(shù)值 >6．10(表 1)。
2．4 連 續(xù)使 用穩(wěn) 定性試驗(yàn)
鄰苯二 甲醛消毒劑原 液連續(xù) 浸 泡 醫(yī)療器械 7、14d后，作用 3h，對(duì)不銹鋼片上枯草 桿菌黑 色 變 種芽孢的平均 殺滅對(duì)數(shù)值 均 >3．00；強(qiáng) 化戊二 醛消毒 劑原 液連續(xù)浸泡 醫(yī)療器械 7、14d后，作 用 3h，對(duì)芽孢 的殺滅對(duì)數(shù) 值均 >6．o0(表 2)。 表 1 不 同時(shí)間 2種消毒劑對(duì)枯草桿菌 黑色 變種 芽孢殺滅 效果比較
注 ：陽(yáng)性對(duì) 照組平均菌 數(shù)為 1272000cfu／片。結(jié) 果為 3次試驗(yàn) 平均值 。
表 2 2種 消毒 劑不 同作 用時(shí) 間的平均殺滅對(duì)數(shù)值
注 ：結(jié)果為 3次試驗(yàn)平均值。
3 討 論
本次試 驗(yàn)結(jié) 果表 明，0，53％鄰苯 二 甲醛 消毒劑 原液 作用 3h可對(duì)芽孢達(dá)到 消毒效 果，但 與強(qiáng) 化戊 二醛 的 殺芽 孢效果 有一定差距，與黃育 紅報(bào)道 基本一 致 【6】。本 次鄰 苯二 甲醛消 毒劑 殺滅芽孢 的結(jié)果 明顯 不如 許能 鋒等 報(bào)道 【3】的 國(guó)內(nèi)鄰 苯 二甲醛 消毒 劑，可能與進(jìn) 口為單方制劑 ，而 國(guó)內(nèi)鄰苯二 甲醛 消
毒劑多與醇類、季銨鹽類及乳 化劑等復(fù) 配，且 pH值在 8．0以 上有關(guān) ；許能鋒等 已證實(shí) ，含表面活性劑的堿性鄰苯二 甲醛 殺 芽孢效果最 好 。 由于戊二醛在 內(nèi)鏡 消毒 中逐漸 暴露諸 多 問(wèn)題 ，且 使用 前 要活化、使用濃度相對(duì)高等缺 陷，國(guó) 內(nèi)外學(xué)者均提 出用鄰苯 二 甲醛消毒劑 替代戊 二醛 用于 內(nèi)鏡 消毒 [2， 。本 次研 究證 明， 鄰苯二 甲醛 消毒 劑具備高 水平消毒效果 ，且使 用穩(wěn)定性好，可 連續(xù)使用 14d。 實(shí)驗(yàn) 中發(fā)現(xiàn)鄰 苯二 甲醛 消毒 液接 觸皮 膚、衣 物后 會(huì)有灰 色反應(yīng)不易洗去；其產(chǎn)品說(shuō)明中也標(biāo)注“消毒后務(wù)必正確沖洗 干凈 ；可能引起過(guò)敏反應(yīng) ；與 消毒液接 觸可能使裸露 的皮膚或 衣服染 色；應(yīng)避免與眼睛、皮膚 或衣服接 觸”，使用中仍應(yīng) 引起 注意 。
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